🧬 质粒小提 是指从少量菌液(一般1-5ml)中提取质粒DNA的过程,简便、快速。质粒中提 一般使用30-50ml菌液,大提 使用100-500ml菌液,会得到更多质粒。平时我们接触的比较多的一般就是小提和中提。质粒小提的菌量少,那么如何提出更多质粒?今天师兄就来讲讲小提的一些技巧和注意事项。
⏰ 控制培养时间:一般培养菌液12-16小时,培养时间过短菌体生长不充分,过长则菌体死亡☠,影响质粒提取效果。
🌊 裂解步骤温和混合:加入裂解液后要温和地混合,避免剧烈震荡,以免使基因组DNA断裂污染质粒。所用时间不应超过5分钟,防止质粒被破坏。
🧼 彻底裂解菌液:裂解后菌液应变清亮,若未变清亮,可能是菌体过多裂解不彻底,可适当按比例加大裂解液用量。
🌬 洗涤时彻底去除乙醇:在洗涤步骤后,需空甩离心并晾干一会儿,防止乙醇残留影响后续实验。
🔥 优化洗脱液使用:将洗脱缓冲液或灭菌蒸馏水预热至60℃后使用,选择低盐溶液且pH在7.0-8.5之间,以提高洗脱效率。洗脱液应准确加入膜中心部位,并延长静置时间1-2分钟,必要时可进行多次洗脱。
🌟 选择合适的质粒载体和活性高的菌:根据质粒类型选择合适的菌。如果甘油菌保存时间太长,菌的活性下降,可以考虑涂板挑单克隆重新保种。
信天翁的无内毒素质粒小提试剂盒,步骤简单,使用方便,提取效率高,35分钟即可完成质粒提取!而且内毒素去除较为彻底,后续用于转染、PCR、酶切等实验全都没问题!